Pencegahan penyebaran penyakit salah satunya adalah membersihkan tangan menggunakan hand sanitizer. Hand sanitizer pembersih tangan antiseptik inovatif saat ini, sering menjadi alternatif pengganti cuci tangan dengan sabun dan air. Mencuci tangan dengan hand sanitizer merupakan salah satu cara memlihara kebersihan tangan agar terhindar dari penyakit yang disebabkan yang berpotensi patogenik seperti bakteri escherichia coli. Tujuan penelitian ini adalah membuat sediaan hand sanitizer cair dengan ekstrak jeruk nipis (citrus aurantifolia) dan lidah buaya (aloe vera) yang dapat membunuh bakteri escherichia coli. Pada penelitian ini dilakukan pengukuran pH sediaan hand sanitizer cair dengan ekstrak jeruk nipis (citrus aurantifolia) dan lidah buaya (aloe vera) didapat hasil pH adalah 5 dan untuk penetapan bobot jenis dihasilkan bobot jenis yaitu 4,2189 g/ml. Untuk sediaan hand sanitizer cair dengan ekstrak jeruk nipis (citrus aurantifolia) didapat hasil pH adalah 4 dan untuk penetapan bobot jenis dihasilkan bobot jenis yaitu 4,1965 g/ml. Untuk sediaan hand sanitizer cair dengan ekstrak lidah buaya (aloe vera) didapat hasil pH adalah 6 dan untuk penetapan bobot jenis dihasilkan bobot jenis yaitu 4,1681 g/ml. Pengujian uji daya bunuh kuman sediaan hand sanitizer cair dengan ekstrak jeruk nipis (citrus aurantifolia), lidah buaya (aloe vera), ekstrak jeruk nipis (citrus aurantifolia) dan lidah buaya (aloe vera) dilakukan dengan metode percentage kill pada dua waktu kontak yaitu 30 dan 60 detik. Didapatkan hasil percentage kill semua sediaan hand sanitizer cair pada dua waktu kontak tersebut yaitu dengan nilai percentage kill sebesar 99,9%. Ada pengaruh penggunaan hand sanitizer berbahan aktif alkohol dengan penambahan ekstrak jeruk nipis (citrus aurantifolia) dan lidah buaya (aloe vera) terhadap pH, bobot jenis dan daya bunuh kuman.
Kata Kunci: Hand sanitizer, Jeruk Nipis, Lidah Buaya, Percentage Kill